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        耗材專區 | 應用EZsep™ HMR-Lipid固相萃取柱檢測魚肉中水楊酸殘留量

        更新時間:2024-10-18       點擊次數:260

        前言


        水楊酸,分子式為C7H6O3,是植物柳樹皮提取物,是一種天然的消炎藥。水楊酸可以殺菌、消炎,從而常被用于對水產動物體表的水霉、鰓霉的剝離分解及傷口修復,水產動物因紅斑、皮膚病、打印、赤皮、爛尾、潰爛、腐皮、膚霉、脫粘、白頭白嘴、爛鰓、水腫、出血等引起的多種傷口能快速愈合。本品定期使用能有效預防和降低水產品發病率并快速凈化水體,從而抑制降解水體中的各種雜菌及病原體,但長期過量使用會造成藥物在動物體內富集,人類食用這些水產品會使殘留的獸藥進入人體,從而影響人體健康。

        本文參照《魚可食性組織中水楊酸殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法(征求意見稿)》,利用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300mg/6mL,貨號:PZ12624) 凈化樣品,再通過高效液相色譜串聯質譜檢測進行檢測,建立了魚肉中水楊酸殘留量的分析方法。



        1

        實驗過程



        1.1 儀器與試劑
        MPREP-SPE08手動固相萃取裝置,貨號:PZ0008,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
        E.T.氮吹濃縮儀,貨號:C020017,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
        4500質譜系統,SCIEX公司;
        EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,貨號:PZ12624),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
        冷凍離心機,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學儀器廠;
        乙腈(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
        甲酸(分析純),購自國藥集團化學試劑有限公司。

        1.2 工作液配制
        水楊酸標準物質:100mg/瓶,購自壇墨質檢標準物質中心。
        水楊酸標準儲備液:取水楊酸標準品適量(相當于有效成分約10mg),精密稱定,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1000μg/mL的水楊酸標準儲備液。
        水楊酸D4標準儲備液:濃度為100μg/mL溶劑為甲醇,購自上海安譜實驗科技股份有限公司。
        水楊酸標準中間液:移取水楊酸標準儲備液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為10μg/mL的水楊酸標準中間液。
        水楊酸標準使用液:水楊酸標準中間液1.0mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸標準使用液。
        水楊酸D4標準使用液:移取水楊酸標準儲備液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸D4標準使用液。
        依次移取1.0μg/mL的水楊酸標準使用液0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0mL,分別置于10mL容量瓶中并均加入水楊酸D4標準使用液0.2mL,以0.1%甲酸水溶液定容至刻度,得到濃度依次為0μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的標準系列工作液,水楊酸D4濃度固定為20μg/L。

        1.3 實驗部分
        1.3.1 樣品制備
        取魚肉試樣2g,置于50mL聚丙烯離心管中,添加水楊酸D4標準工作液40μL,加5%甲酸乙腈溶液10.0mL,渦旋混勻1min超聲提取10min,10000r/min冷凍離心5min,收集上清液5.0mL待凈化
        1.3.2 固相萃取凈化
        EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,貨號:PZ12624)用5mL乙腈進行活化,取1.3.1待凈化液上樣,收集流出液,以E.T.氮吹濃縮儀,40℃氮氣濃縮至近干,加1.0mL0.1%甲酸水溶液,渦旋混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
        1.3.1 LC-MS/MS儀器條件
        色譜柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);
        檢測方式:多反應監測(MRM);
        流動相:A:0.1%甲酸水溶液;B:乙腈;
        流速:0.3mL/min。

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        表1 流動相梯度洗脫表


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        實驗結果



        耗材專區 | 應用EZsep™ HMR-Lipid固相萃取柱檢測魚肉中水楊酸殘留量

        表2 加標回收率

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        圖1 標液色譜圖

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        圖2 空白樣品色譜圖

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        圖3 10μg/kg樣品添加色譜圖

        3

        實驗結論



        本實驗使用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300mg/6mL,貨號:PZ12624) 對魚肉樣品進行凈化,通過高效液相色譜串聯質譜測定其中的水楊酸殘留量,該方法的加標回收率在95.0%~105.3%之間,RSD為3.8%,滿足標準要求。測試結果說明EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,貨號:PZ12624)能很好的完成方法中的凈化工作,并且結果穩定、可靠

        4

        參考文獻



        [1] 《魚可食性組織中水楊酸殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法(征求意見稿)》



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